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ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析

ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析

简要描述:

ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析 ATCC15834电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型为Agrobacterium rhizogenes pRi15834 (agropine type),经pCAMBIA2301质粒(卡那霉素抗性)检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

产品时间:2019-07-19

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ATCC15834 Electrocompetent Cell

农杆菌电转感受态细胞

产品标签

ATCC15834MSU440Ar 1193Ar A4K599C58C1Agrobacterium rhizogenes 发根农杆菌pCAMBIA2301;Streptomycin 链霉素;Rifampicin利福平;

 

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货号

产品名称

规格

价格(元)

MF2466-0500UL

ATCC15834 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞

10×50μl

720

MF2466-2500UL

ATCC15834 Electrocompetent Cell 农杆菌电转感受态细胞

50×50μl

3000

【好消息】:见我司懋康生物整理的根癌(发根)农杆菌感受态细胞技术专题。

 

产品描述

发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)是根瘤菌科农杆属的一种革兰氏阴性土壤细菌,能够侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。起关键作用的是其携带的Ri质粒,含有负责发根自主性生长和冠瘿碱合成的基因。结构上与Ti质粒类似,主要有致毒区(Vir),T-DNA区以及冠瘿碱合成功能区等。

根据合成冠瘿碱的不同,Ri质粒分为4种类型:1)甘露碱型;2)黄瓜碱型;3)农杆碱型;4)米奇矛型。

发根农杆菌菌株ATCC15834来源于American type culture collection (ATCC),为发根农杆菌原始菌株。ATCC15834含pRi15834农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(禾本科,豆科,烟草等),特别适合对紫杉醇,青蒿等药用植物毛状根的诱导。

我司懋康生物提供ATCC15834电转感受态细胞经特殊工艺制作,特别适合大质粒的转化。基因型为Agrobacterium rhizogenes pRi15834 (agropine type),pCAMBIA2301质粒(卡那霉素抗性)检测转化效率>105 cfu/μg DNA。

 

产品包装

组分编号

组分名称

货号(规格)

MF2466-0500UL

MF2466-2500UL

MF2466-A

ATCC15834 Electrocompetent Cell

10×50μl

550μl

MF2466-B

pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl)

10μl

10μl

 

 

注意事项

  • 感受态细胞应保存在-80,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
  • 整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。

3) 加入质粒的体积不应大于感受态体积的1/10。质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,会导致转化效率急剧下降。质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。

  • 为确保高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。

5) 电转感受态细胞中不可混入气泡,转化高浓度的质粒可相应减少最终涂板用量。

6) 平板上克隆密度过大时,由于营养不足,克隆生长变慢,菌落变小。为获得大菌落,应减少质粒用量。

7) ATCC15834生长缓慢,转化质粒后的ATCC15834涂布在含抗生素的平板上应生长72h。

8) 为了保证最加的转化效率,发根农杆菌的培养建议使用TY培养基(配方见附表1)。

9) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

  • 将0.1 cm电基杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净吸水纸上5min,待其沥干水分,正置5min,使乙醇充分挥发干净,立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖,冰中静置5min使其充分降温。
  •  
  • 取-80保存的农杆菌感受态细胞插入冰中5min,待其完全融化。
  • 往50μl感受态细胞悬液中加入0.01~1μg(体积不大于6μl)质粒DNA,用手拍打管底使其混匀,立即插入冰中。用枪轻轻吹打混匀感受态细胞-质粒之后快速转移到电基杯中,盖上杯盖,空管保留待用【注意:质粒DNA最hao用试剂盒抽提,且用双蒸水溶解。由于感受态转化效率较高,第一次使用最hao做预试验确定最加的质粒用量】。
  • 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此参数参考Bio-rad,具体使用请参考电转仪推荐步骤来操作),将电基杯从冰中取出,吸水纸吸干外表面水分,快速放入电转槽中,启动电基,电基完成快速插入冰中。
  • 加入1ml无抗生素的TY并转移到感受态空管中,于28振荡培养2~3h。

6) 6,000rpm离心1min,留取 100ul左右上清,之后用枪轻轻吹打重悬菌体。之后加到含相应抗生素的TY平板上,用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min,待液体被吸收后,倒置平板,28培养72h

 

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10×50μl

 

附表1 固体和液体TY培养基配方

组分Component

TY(液体)/升

TY(固体)/升

胰蛋白胨 Tryptone

5g

5g

酵母提取物 Yeast extract

3g

3g

琼脂 Agar

/

15g

 

补水到1L,121℃,20min高压灭菌

补水到1L,121℃,20min高压灭菌

氯化钙 CaCl2

配制1M CaCl2水溶液,121℃,20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。

配制1M CaCl2水溶液,121℃,20min高压灭菌。之后按照10ml/L加入上方灭菌的液体营养液。

 

附表2 固体和液体YMB培养基配方

组分Component

YMB(液体)/升

YMB(固体)/升

酵母提取物 Yeast extract

1g

1g

MgSO4·7H2O

0.2g

0.2g

K2HPO4

0.5g

0.5g

NaCl

0.1g

0.1g

甘露醇

10g

10g

琼脂 Agar

/

15g

 

补水到1L,完全溶解后,调pH至7.0,121℃,20min高压灭菌

补水到1L,完全溶解后,调pH至7.0,121℃,20min高压灭菌

 

附表3常见发根农杆菌对抗生素敏感性总表

农杆菌菌株

羧苄(carb)

链霉素(strep)

利福平(rif)

庆大霉素(gent)

卡那霉素(kan)

Ar A4

S

S

S

S

R

Ar Qual

S

R

S

R

S

Ar 1193

R

R

R

S

S

K599

S

R

S

S

S

C58C1

S

R

R

S

S

MSU440

S

R

S

S

S

ATCC15834

S

S

S

S

S

备注】:S代表敏感,R代表抗性。

 

附表4 ATCC15834菌株质粒转化筛选抗生素使用浓度

抗生素

配方

筛选培养基

母液

工作液

硫酸卡那霉素

去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌

YMB 或 TY

100mg/ml

100μg/ml

壮观霉素

去离子水溶解,0.22μm滤膜除菌

TY

50mg/ml

70μg/ml

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作,主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承以人为本,以诚为信、合同守信的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

 

ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析

ATCC15834 农杆菌电转感受态细胞 表达分析

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