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技术文章
科普一下什么是嘌呤霉素
   嘌呤霉素(puromycin;PM ) 是一种蛋白质合成抑制剂,它具有与tRNA分子末端类似的结构,能够同氨基酸结合,代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合,并掺入到生长的肽链中。虽然嘌呤霉素能够同A位点结合,但是不能参与随后的任何反应, 因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。

  可由白色链球菌(Streptomyces.alboniger)发酵制得的抗生素。熔点175.5~177.0℃。旋光度-11 (乙醇)。在酸性溶液中分解成为6-二嘌呤,O-甲基-L-酷氨酸及3-氨基-3-去氧核糖。结构与氨基酰tRNA分子中腺苷相连结的氨基酸末端基因相似,因而它可作氨基酰tRNA的类似物,从而取代一些氨基酰tRNA进入核糖体的A位与正在延伸的多肽链结合,当延长中的肽转入此异常A位时,容易脱落,以肽基嘌呤霉素的形式从核糖核蛋白体上早期解离,终止肽链合成,从而抑制了蛋白质的合成。由于嘌呤霉素对原核和真核生物的翻译过程均有干扰作用,故难于用做抗菌药物,主要用作研究蛋白质合成的生物化学工具。有人试用于肿瘤治疗。

  嘌呤霉素在分子生物学和细胞生物学中常作为稳定细胞系筛选用试剂。在使用带有PuroR筛选标记的载体DNA转染动植物细胞时,向动植物细胞培养基加入嘌呤霉素可以杀死没有被转染的细胞,筛选出阳性转染细胞,建立稳定细胞系。嘌呤霉素可以在较低浓度水平起作用,作用快,在不到1周的时间内筛选出稳定细胞系。

  嘌呤霉素配制方法:

  先将使用到的所有器具去除内毒素和其它污染源,仪器表面、工作台面消毒。

  在分析天平上称取嘌呤霉素粉末0.050 g,加10 mL 无菌HEPES溶液溶解。

  用专用的超滤滤膜过滤到去除内毒素的容器中,然后分装到 1.5 mL EP管中。

  不建议使用螺旋盖管子,容易污染。-20度保存。

  为避免污染和失效,建议分装成小规格的,如100 uL。

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