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科普一下钙离子荧光探针系列的三种使用方法

  科普一下钙离子荧光探针系列的三种使用方法

  1、贴壁细胞

  A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养级PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,使约为50%-80%满。

  B. 刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5ml固定液,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

  C. 去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。

  D. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分钟。也宜用摇床,或手动晃动数次。

  E. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。

  F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,尽量避免气泡。使细胞接触封片液,切勿弄反。

  G. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长在350nm左右,发射波长在460nm左右,详细图谱请参考下图。

  2、悬浮细胞

  A. 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内,加入0.5ml固定液,缓缓悬起细胞,固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。

  B. 离心去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。洗涤期间手动晃动。

  C. 后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体,再缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量使细胞分布均匀。

  D. 稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。

  E. 均匀滴上0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干。

  F. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。

  G. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。

  H. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长在350nm左右,发射波长在460nm左.

  3、组织切片

  A. 对于任何常见切片,处理至常规可以进行免疫染色时,或完成常规的免疫染色后,即可进行后续的Hoechst染色。B. PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。可在六孔板中操作。

  C. 加入0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分钟。也宜用摇床,或手动晃动。

  D. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。

  E. 将切片置于载玻片上,滴一滴抗淬灭封片液,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。

  F. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长在350nm左右,发射波长在460nm左右,

  Hoechst 33258的吸收光谱和发射光谱,左侧峰为吸收光谱,右侧峰为发射光谱。

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